Кровь кроликов на сыворотку

Фармакологическая группа

Условия хранения Сыворотка преципитирующая белки сыворотки крови кролика диагностическая абсорбированная кроличья для судебно-медицинских целей жидкая

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности Сыворотка преципитирующая белки сыворотки крови кролика диагностическая абсорбированная кроличья для судебно-медицинских целей жидкая

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Оставьте свой комментарий

Текущий индекс информационного спроса, ‰

  • ФСР 2007/00346
  • Официальный сайт компании РЛС ® . Главная энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента российского интернета. Справочник лекарственных препаратов Rlsnet.ru предоставляет пользователям доступ к инструкциям, ценам и описаниям лекарственных средств, БАДов, медицинских изделий, медицинских приборов и других товаров. Фармакологический справочник включает информацию о составе и форме выпуска, фармакологическом действии, показаниях к применению, противопоказаниях, побочных действиях, взаимодействии лекарств, способе применения лекарственных препаратов, фармацевтических компаниях. Лекарственный справочник содержит цены на лекарства и товары фармацевтического рынка в Москве и других городах России.

    Запрещена передача, копирование, распространение информации без разрешения ООО «РЛС-Патент».
    При цитировании информационных материалов, опубликованных на страницах сайта www.rlsnet.ru, ссылка на источник информации обязательна.

    Еще много интересного

    © РЕГИСТР ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РОССИИ ® РЛС ® , 2000-2020.

    Все права защищены.

    Не разрешается коммерческое использование материалов.

    Информация предназначена для медицинских специалистов.

    480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ‘, MOUSEOFF, FGCOLOR, ‘#FFFFCC’,BGCOLOR, ‘#393939’);» onMouseOut=»return nd();»> Диссертация, — 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

    Автореферат — бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

    Бадрутдинов Нияз Вакифович. Применение сыворотки крови кроликов при культивировании перевиваемых клеток и репродукции на них вирусов : диссертация . кандидата биологических наук : 06.02.02, 03.01.06 / Бадрутдинов Нияз Вакифович; [Место защиты: Федер. центр токсик. и радиац. безопасности животных].- Казань, 2010.- 124 с.: ил. РГБ ОД, 61 10-3/1067

    Введение к работе

    1.1 Актуальность темы. Важнейшей составной частью питательных
    сред, содержащих факторы роста клеточных популяций, является сыворотка
    крови животных. Чаще всего для этой цели используют сыворотку крови
    крупного рогатого скота (Т.И. Дроздова и др., 1983; Л.П. Дьяконов и др.,
    2009 и т.д.). Из литературных источников (Е. Evege et al., 1985; D. Jayme et
    al., 1988 и т.д.) следует, что лучшей является сыворотка крови плодов
    крупного рогатого скота, однако широкое ее использование ограничивается,
    прежде всего, дефицитом и высокой стоимостью.

    Ограниченность применения кроличьей сыворотки в биотехнологии связана, вероятно, с первоначальным, необъективным, на наш взгляд, определением ее возможностей в этой области И.И. Подоплеловым и др. (1965). Данная биологическая добавка была оценена авторами негативно при выращивании культуры клеток CaVe. Между тем, в последние годы об использовании сыворотки крови кроликов при культивировании клеток животных тканей стали упоминать чаще и с позитивных позиций (Дьяконов Л.П., 2000; каталог-справочник «Реактивы для биохимии и исследований в области естественных наук» фирмы «Sigma-aldrich», США, 2004-2005; сайт компании «Abkam», США, , 2009). Существенным преимуществом ее перед сывороткой крови крупного рогатого скота, является гетеровидовой характер по отношению к большинству возбудителей вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных.

    1.2 Цель и задачи исследований. Цель работы состояла в изучении
    возможности применения кроличьей сыворотки в качестве биологический
    добавки в питательные среды при выращивания культур клеток и

    репродукции на них вирусов. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

    1. Найти наиболее приемлемый метод взятия крови у кроликов на
    кролиководческих предприятиях в условиях производственного их убоя.

    Получить кроличью сыворотку, достаточную по объему для проведения вирусологических и биотехнологических исследований на культурах клеток.

    Определить вариабельность биохимического состава сыворотки крови кроликов от их половой принадлежности и сезона года.

    Оценить ростовые свойства сыворотки крови кроликов на перевиваемых культурах клеток MDBK, ВНК-21/13-02, LEK, SPEV, Vero, при непродолжительной адаптации к данной биологической добавке в культуральных средах.

    Установить особенности репродукции вирусов на перевиваемых культурах клеток LEK и Vera, выращенных на средах с добавлением кроличьей сыворотки.

    1.3 Научная новизна работы. Впервые рассматривается возможность
    введения сыворотки крови кроликов в практику культивирования клеток.
    Дается ее физико-биохимическая характеристика в зависимости от половой
    принадлежности кроликов. Показаны особенности ее влияния на рост и
    морфологию перевиваемых культур клеток животных разных видов (SPEV —
    почки эмбриона свиньи, MDBK — почки эмбриона крупного рогатого скота,
    ВНК-21/13-02 — почки новорожденного сирийского хомячка, LEK — легкого
    эмбриона крупного рогатого скота, Vero — почки африканской зеленой
    мартышки). Впервые проведена оценка репродукции вирусов инфекционного
    ринотрахеита (ИРТ) и парагриппа-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота на
    культуре клеток LEK, а также реовируса типа 1 штамм «Lang» на линии
    клеток Vero, при их выращивании с использованием кроличьей сыворотки.

    1.4 Практическая ценность работы. Разработана технология
    получения сыворотки крови кроликов в производственных условиях и

    показана возможность ее применения в средах для культивирования перевиваемых клеток и репродукция на них вирусов. Кроличья сыворотка, являющаяся гетеровидовой по отношению практически ко всем культурам клеток, хранящимся в криобанке ФГУ «ФЦТРБ — ВНИВЙ», применяемая в качестве ростстимулирующего фактора, позволяет снизить вероятность вирусной контаминации культур клеток и повысить репродукцию вирусов на них.

    На основе полученных данных разработана «Временная инструкция по получению и контролю качества сыворотки крови кроликов для культивирования клеток животных тканей» (2010 г).

    Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, доложены и обсуждены на следующих научных форумах: Научно-практические конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» (Казань, 2007) и «Достижения молодых ученых — в производство», посвященная 100-летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдулина (Казань, 2008); Международные научно-практические конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященная 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008); «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных» (Покров, 2008); «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», к юбилею кафедры органической и биологической химии МГАВМиБ (Москва, 2008); «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» (Казань 2009); Московская международная научно-практическая конференция «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010).

    Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 — в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

    1.7 Основные положения, выносимые на защиту:

    усовершенствование технологии получения сыворотки крови кроликов применительно к условиям производственного их убоя;

    зависимость биохимического состава сывороток крови кроликов от половой принадлежности и сезона года;

    пролиферативная активность перевиваемых культур клеток MDBK, ВНК-21/13-02, LEK, SPEV, Vero на среде с сывороткой крови кроликов;

    стабильная репродукция вирусов ИРТ и ПГ-3 на перевиваемой культуре клеток LEK, и высокая при репродукции реовируса на линии клеток Vero, выращенных на среде с использованием сыворотки крови кроликов.

    1.8 Реализация результатов исследований. Результаты выполненных
    исследований используются в лаборатории культур клеток и гибридомной
    технологии ФГУ «ФЦГРБ — ВНИВИ» при культивировании перевиваемых
    линий животных клеток для изготовления вакцин.

    1.9 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа
    изложена на 124 страницах компьютерного текста, состоит из следующих
    традиционных разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы
    исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение,
    заключение, выводы, практические предложения, список использованной
    литературы. Работа содержит 14 таблиц, проиллюстрирована 22 рисунками.
    Список литературы включает 188 библиографических источников, в том
    числе 75 на иностранном языке.

    Научно-исследовательский институт судебной медицины (дир.— проф.В. И. Прозоровский) Министерства здравоохранения СССР, Москва

    Кроличьи иммунные диагностические сыворотки, преципитирующие белки крови оленей. Использование в судебной медицине. Потапов М.И., Тураева В.Ф. Суд.-мед. эксперт., 1976., № 1, с. 37-39.

    Иммунизировали кроликов сыворотки крови благородного оленя, северного оленя, лося. После длительной (7—13 мес) многократной абсорбции для удаления побочных преципитинов получены сыворотки, реагирующие преимущественно с кровью изюбра, северного оленя или лося.

    библиографическое описание:
    Кроличьи иммунные диагностические сыворотки, преципитирующие белки крови оленей. Использование в судебной медицине / Потапов М.И., Тураева В.Ф. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1976. — №1. — С. 37-39.

    код для вставки на форум:

    В Постановлении Верховного Совета СССР от 20/IX 1972 г. охрана животного и растительного мира страны считается одной из важнейших государственных задач. При расследовании дел о браконьерстве, незаконном убое и хищении домашних и одомашненных животных, о незаконной продаже, скупке и переработке шкурок существенную помощь следствию оказывает судебно-медицинская экспертиза с применением серологических методов. По отношению к крови животных отряда парнокопытных Институт судебной медицины изготовляет кроличьи сыворотки, преципитирующие белки крови лося, свиньи, рогатого скота, крупного или мелкого рогатого скота. Первая сыворотка реагирует не только с кровью лося (род лося семейства оленьих), но и с почти равной интенсивностью и с кровью представителей других родов этого семейства (косули, настоящие олени, северные олени). Это иногда не позволяет решить существенный вопрос о том, принадлежат ли представленные на экспертизу пятна крови и мясо лосю или оленю.

    Задача работы состояла в изготовлении сывороток, преципитирующих кровь преимущественно оленей или лося, путем иммунизации кроликов сывороткой крови благородного оленя (изюбра), северного оленя или лося.

    Материал и метод. 13 кроликов иммунизировали сывороткой крови изюбра, 10 кроликов— сывороткой крови северного оленя, 10 кроликов — сывороткой европейского лося. Количество кроликов, в сыворотке которых исходный титр преципитинов был 1: 10 000 до 10—12 мин наблюдения, оказалось соответственно 10, 8, 4. Сходные по серологическим показателям сыворотки были объединены в серии. Путем многократной абсорбции в течение 13 мес были изготовлены 2 серии сывороток, преципитирующих кровь изюбра. Побочные преципитины иммунных сывороток удаляли нативными сыворотками крови быка, барана, козы, лося. 5 серий сыворотки, преципитирующей кровь северного оленя, также длительно (7—11 мес) многократно абсорбировали нативными сыворотками крови человека, лошади, быка, барана, козы, свиньи, собаки, кошки, лося. Те же сыворотки (но без лосиной) использовали при изготовлении в течение 7—10 мес 2 серий иммунной сыворотки, преципитирующей кровь лося. Абсорбцию каждой серии сыворотки осуществляли после контроля ее серологической активности с нативными сыворотками крови человека, лошади, свиньи, собаки, кошки, курицы, быка, барана, козы, косули, лося, изюбра, северного оленя. Весь процесс изготовления диагностических сывороток был направлен на достижение наибольшей разницы во времени наступления преципитации с кровью животных дифференцируемых видов.

    Характеристика некоторых кроличьих иммунных сывороток, взаимодействующих с кровью животных семейства оленьих

    26

    30

    10

    19

    4

    Сыворотки, преципитирующие
    кровь представителей семейства:
    Нормальные сыворотки крови и их разведения ? 1000
    изюбр северный олень лось косуля
    1 5 10 1 5 10 1 5 10 1 6 10
    оленьих 2 5 12 3 7 11 1 4 7 4 14 20
    лося 60 90 60 90 20 30 30 60 90
    северного оленя 60 13 24 19 60 90 20 90
    изюбра 4 14 19 23 35 45 25 60 80 23 55 70

    Примечание. Цифры обозначают время (в мин) появления преципитата; — отсутствие реакции в течение 90 мин.

    Полученные результаты. Изготовлены иммунные сыворотки 4 категорий (см. таблицу). В реакции кольцепреципитации все эти сыворотки были специфичными, т.е. в течение 90 мин не преципитировали белки крови человека, лошади, свиньи, собаки, кошки, курицы в разведении их 1:1000. С сыворотками крови быка, барана, козы, разведенными 1:5000 и 1:10 000, реакция была отрицательной в течение 90 мин; в разведении 1 : 1000 преципитаты появлялись от 30 до 65 мин. С кровью кабарги сыворотки не испытывали.

    Сыворотки первой категории позволяли устанавливать принадлежность следов крови к животным семейства оленьих (т.е. к 4 родам его: настоящие олени, северные олени, лось, косуля). Сыворотки 2—4 категорий представляли возможность осуществлять дифференцирование крови животных внутри этого семейства (лось, северный олень настоящие олени), включая отличие рода косули от других родов (положительный исход реакции с сывороткой I категории и отрицательный с сыворотками 3 остальных категорий).

    В Советском Союзе ареалы естественного обитания и сезонных миграций лося, северного оленя, лани, благородного и пятнистого оленей, косули территориально или совмещаются, или во многих местах перекрывают друг друга. Интенсивно и широко расселяют этих животных в государственные заповедники, заказники, охотничьи и оленеводческие хозяйства, часто с целью акклиматизации и одомашнивания. Поэтому, если следствием поставлен конкретизированный вопрос о возможности происхождения объекта исследования от животных семейства оленьих, то его экспертное решение может быть достигнуто только с применением описанных выше сывороток.

    похожие статьи

    Обнаружение эклипсных антигенов в трупной крови / Локтева Р.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2020. — №18. — С. 127-131.

  • Специальность ВАК РФ 06.02.02
  • Количество страниц 125
  • Скачать автореферат
  • Читать автореферат

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бадрутдинов, Нияз Вакифович

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ И

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Сыворотка крови животных — ростстимулирующий компонент культуральных питательных сред.

1.1.1 Влияние сыворотки крови в составе питательных сред на культивируемые клетки.

1.1.2 Влияние сывороточных факторов на репродукцию вирусов в культурах клеток.

1.2 Физико-химические свойства сыворотки крови кроликов и сельскохозяйственных животных.

1.2.1 Биохимический состав.

1.2.2 Неорганические компоненты.

1.2.3 Потенциальные возможности использования сыворотки крови кроликов в биотехнологии.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.1 МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.2 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1 Разработка технологии получения сыворотки крови кроликов для биотехнологических целей.

2.2.2 Физико-химические и биохимические свойства сыворотки крови кроликов. культивировании перевиваемых линий клеток.

2.2.4 Репродукции вирусов при добавлении в питательную среду сыворотки крови кроликов.

2.2.5 Корреляционные отношения биохимических характеристик сывороток крови кроликов с их ростстимулирующими свойствами.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», 06.02.02 шифр ВАК

Применение тканевых экстрактов плодов коров при репродукции вирусов на перевиваемых линиях клеток 2009 год, кандидат биологических наук Закиров, Рафис Рафикович

Применение комбинаций сывороток крови различных видов животных для культивирования клеток и репродукции вирусов 2007 год, кандидат биологических наук Ганиев, Ильнур Махмутович

Разработка и совершенствование биотехнологических приемов приготовления рабического антигена для производства гетерологичного антирабического иммуноглобулина 2013 год, кандидат биологических наук Матвеева, Жанна Владимировна

Влияние фито — зооэкстрактов на вирусрепродуцирующие свойства культивируемых клеток 2013 год, кандидат биологических наук Хазиев, Ленар Ринатович

Репродукция производственных штаммов вирусов на культуре клеток новорожденных крольчат 2013 год, кандидат биологических наук Глаголева, Ирина Сергеевна

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Применение сыворотки крови кроликов при культивировании перевиваемых клеток и репродукции на них вирусов»

1.1 Актуальность темы. Важнейшей составной частью питательных сред, содержащих факторы роста клеточных популяций, является сыворотка крови животных. Чаще всего для этой цели используют сыворотку крови крупного рогатого скота (Т.И. Дроздова и др., 1983; Л.П. Дьяконов и др., 2009 и т.д.). Из литературных источников (Е. Evege et al., 1985; D. Jayme et al., 1988 и т.д.) следует, что лучшей является сыворотка крови плодов крупного рогатого скота, однако широкое ее использование ограничивается, прежде всего, дефицитом и высокой стоимостью.

Ограниченность применения кроличьей сыворотки в биотехнологии связана, вероятно, с первоначальным, необъективным, на наш взгляд, определением ее возможностей в этой области И.И. Подоплеловым и др. (1965). Данная биологическая добавка была оценена авторами негативно при выращивании культуры клеток CaVe. .Между тем, в последние годы об использовании сыворотки крови кроликов при культивировании клеток животных тканей стали упоминать чаще и с позитивных позиций (Дьяконов Л.П., 2000; каталог-справочник «Реактивы для биохимии и исследований в области естественных наук» фирмы «Sigma-aldrich», США, 2004-2005; сайт компании «Abkam», США, www.abcam.com, 2009). Существенным преимуществом ее перед сывороткой крови крупного рогатого скота, является гетеровидовой характер по отношению к большинству возбудителей вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных.

Исходя из вышеизложенного, нами изучены биохимический состав сыворотки крови кроликов, а также ее биологические эффекты на пролиферацию перевиваемых культур клеток и репродукцию на них вирусов.

1.2 Цель и задачи исследований. Цель работы состояла в изучении возможности применения кроличьей сыворотки в качестве биологический добавки в питательные среды при выращивания культур клеток и репродукции на них вирусов. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Найти наиболее приемлемый метод взятия крови у кроликов на кролиководческих предприятиях в условиях производственного их убоя.

2. Получить кроличью сыворотку, достаточную по объему для проведения вирусологических и биотехнологических исследований на культурах клеток.

3. Определить вариабельность биохимического состава сыворотки крови кроликов от их половой принадлежности и сезона года.

4. Оценить ростовые свойства сыворотки крови кроликов на перевиваемых культурах клеток MDBK, ВНК-21/13-02, LEK, SPEV, Vero, при непродолжительной адаптации к данной биологической добавке в культуральных средах.

5. Установить особенности репродукции вирусов на перевиваемых культурах клеток LEK и Vero, выращенных на средах с добавлением кроличьей сыворотки.

1.3 Научная новизна работы. Впервые рассматривается возможность введения сыворотки крови кроликов в практику культивирования клеток. Дается ее физико-биохимическая характеристика в зависимости от половой принадлежности кроликов. Показаны особенности ее влияния на рост и морфологию перевиваемых культур клеток животных разных видов (SPEV — почки эмбриона свиньи, MDBK — почки эмбриона крупного рогатого скота, ВНК-21/13-02 — почки новорожденного сирийского хомячка, LEK — легкого эмбриона крупного рогатого скота, Vero — почки африканской зеленой мартышки). Впервые проведена оценка репродукции вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и парагриппа-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота на культуре клеток LEK, а также реовируса типа 1 штамм «Lang» на линии клеток Vero, при их выращивании с использованием кроличьей сыворотки.

1.4 Практическая ценность работы. Разработана технология получения сыворотки крови кроликов в производственных условиях и показана возможность ее применения в средах для культивирования перевиваемых клеток и репродукция на них вирусов. Кроличья сыворотка, являющаяся гетеровидовой по отношению практически ко всем культурам клеток, хранящимся в криобанке ФГУ «ФЦТРБ — ВНИВИ», применяемая в качестве ростстимулирующего фактора, позволяет снизить вероятность вирусной контаминации культур клеток и повысить репродукцию вирусов на них.

Утверждена директором ФГУ «ФЦТРБ — ВНИВИ» «Временная инструкция по получению и контролю качества сыворотки крови кроликов для культивирования клеток животных тканей» от 17 мая 2010 г.

1.5 Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, доложены и обсуждены на следующих научных форумах: Научно-практические конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» (Казань, 2007) и «Достижения молодых ученых — в производство», посвященная 100-летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдулина (Казань, 2008); Международные научно-практические конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященная 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008); «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных» (Покров, 2008); «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», к юбилею кафедры органической и биологической химии МГАВМиБ (Москва, 2008); «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» (Казань 2009); Московская международная. научно-практическая конференция «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010).

1.6 Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в’том числе 3 — в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ:

— усовершенствование технологии получения сыворотки крови кроликов применительно к условиям производственного их убоя;

— зависимость биохимического состава сывороток крови кроликов от половой принадлежности и сезона года;

— пролиферативная активность перевиваемых культур клеток MDBK, ВНК-21/13-02, LEK, SPEV, Vero на среде с сывороткой крови кроликов;

— стабильная репродукция вирусов ИРТ и ПГ-3 на перевиваемой культуре клеток LEK, и высокая при репродукции реовируса на линии клеток Vero, выращенных на среде с использованием сыворотки крови кроликов.

1.8 Реализация результатов исследований. Результаты выполненных исследований используются в лаборатории культур клеток и гибридомной технологии ФГУ «ФЦТРБ — ВНИВИ» при культивировании перевиваемых линий животных клеток для изготовления вакцин.

1.9 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах компьютерного текста, состоит из следующих традиционных разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Работа содержит 14 таблиц, проиллюстрирована 22 рисунками. Список литературы включает 194 источников, в том числе 77 на иностранном языке.


Увеличить

Цена: Позвоните, чтобы уточнить цену

Сыворотка крови кролика стерильная

Применяется для культивирования клеток для ускорения роста.

Сыворотка после получения центрифугируется и стерильно фильтруется через фильтр с размером пор 200 нм. Каждая партия проходит тесты на стерильность, отсутствие эндотоксинов и микоплазмы.

Данный продукт предназначен для исследовательских целей.

Страна происхождения: Франция. Сыворотка получена от животных-доноров.

Хранить в защищенном от света месте при температуре -20 о С.

Срок годности 5 лет.

Поиск
Расширенный поиск
Показать корзину
Ваша корзина пуста.

Информация о ценах на товары на нашем сайте носит справочно-информационный характер и не является публичной офертой.

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение содержания ОФС.1.8.2.0008.15

антиальфастафилолизина

(специфических антител)

в лекарственных препаратах

из сыворотки крови человека

и животных Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения содержания антиальфастафилолизина (специфических антител), предназначенный для оценки специфической активности препаратов крови (донорская плазма, плазма для фракционирования, иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного и внутримышечного введения, иммуноглобулин человека антистафилококковый для внутримышечного введения), иммуногенности анатоксинов стафилококковых (раствора и суспензии) для подкожного введения, а также для определения активности токсина стафилококкового диагностического. С помощью описываемого метода определяют содержание антиальфастафилолизина – специфических антител к экзотоксину стафилококковому (син.: альфа-токсин, токсин стафилококковый, альфастафилолизин).

Метод основан на способности специфических антител нейтрализовать гемолитические свойства стафилококкового альфатоксина.

— 0,9 % раствор натрия хлорида (рН 7,2 ± 0,1 );

— стандартный образец (СО) антиальфастафилолизина;

— набор реагентов для определения уровня антиальфастафилолизина в сывороточных препаратах крови человека и животных (токсин стафилококковый диагностический).

Стандартный образец (СО) антиальфастафилолизина представляет собой раствор очищенной концентрированной сыворотки крови лошади в глицерине, полученный путем иммунизации лошадей стафилококковым анатоксином, который содержит антитела к альфастафилолизину. Активность стандартного образца (СО) выражается в Международных единицах (МЕ).

Для того, чтобы исключить искажение результатов испытания специфической активности препаратов, обязательно определяют уровень содержания антиальфастафилолизина в сыворотке крови кроликов-доноров. Пригодными считаются те кролики, в сыворотке крови которых антиальфастафилолизин отсутствует или содержится в количестве не более 0,125 МЕ/мл. Кролик в качестве донора может быть использован в течение 3 – 6 мес.

Кровь берут из сердца или краевой вены уха кролика-донора в стерильный сосуд со стеклянными бусами и дефибринируют её, встряхивая флакон круговыми движениями в течение 10 — 15 мин. Кровь освобождают от сгустка фибрина и бус, в асептических условиях фильтруя ее в стерильный флакон через стерильную марлю, сложенную в три слоя. Дефибринированная кровь пригодна для приготовления взвеси эритроцитов в течение 2 дней при условии хранения её при температуре от 2 до 8°С.

Кровь кролика можно консервировать в равных объемах модифицированного раствора Олсвера.

Приготовление модифицированного раствора Олсвера. В 1200 мл воды очищенной растворяют 24,6 г глюкозы, 9,6 г натрия цитрата, 5,04 г натрия хлорида, доводят рН до 6,1 с помощью 1М раствора лимонной кислоты и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Консервированная кровь пригодна для приготовления взвеси эритроцитов в течение 30 дней при условии хранения при температуре от 2 до 8 0 С.

Методика испытания

В день проведения испытания эритроциты кролика из дефибринированной или консервированной крови отмывают трижды пятикратным объемом 0,9 % раствора натрия хлорида и последующего центрифугирования в течение 15 мин при 1500 об/мин.

Из осадка отмытых эритроцитов готовят 15 % суспензию, используя 0,9% раствор натрия хлорида. Для стандартизации методики устанавливают концентрацию эритроцитов в приготовленной взвеси, определяя оптическую плотность гемолизированного раствора эритроцитов. Для этого к 0,5 мл 15 % взвеси эритроцитов кролика добавляют 2,0 мл воды очищенной, перемешивают круговыми движениями, после чего разводят полученный раствор 1:6.

После приготовления раствора гемолизированных эритроцитов измеряют оптическую плотность раствора гемоглобина, полученного в результате гемолиза, при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 1 мм. Контролем служит вода очищенная. Величина оптической плотности приготовленного раствора должна быть равна 0,53 ± 0,01.

В случае, если этот показатель выше 0,54, к приготовленной 15 % взвеси эритроцитов добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида в объеме (Vдоб), рассчитанном по формуле:

где: Vнач – начальный объем 15 % взвеси эритроцитов;

А400 – значение оптической плотности гемолизированного раствора.

В случае, если значение оптической плотности ниже 0,52, то добавляют отмытые эритроциты в объеме (Vэр.доб), рассчитанном по формуле:

где: Vэр.исх – объем отмытых эритроцитов, использованных для приготовления 15% взвеси, мл;

После добавления 0,9% раствора натрия хлорида или отмытых эритроцитов следует вновь определить оптическую плотность приготовленного раствора. Приготовленная 15% взвесь эритроцитов с установленным значением оптической плотности пригодна для проведения анализа в течение дня.

Токсин стафилококковый диагностический представляет собой фильтрат бульонной культуры токсигенного штамма стафилококка 0-15 и выпускается с установленным значением Lh (лимит гемолитического действия токсина). Лимит гемолитического действия токсина (Lh) – это минимальное количество стафилококкового токсина, соответствующее 1 МЕ (Международной единице) СО антиальфастафилолизина, которое вызывает почти полный гемолиз (+++) взятых в опыт эритроцитов кролика.

В день проведения испытания специфической активности препаратов необходимо установить Lh токсина в условиях опыта, т.к. вследствие влияния различных факторов (нестабильность стафилококкового токсина в процессе хранения, возможные колебания чувствительности отдельных партий эритроцитов кролика и др.) результаты могут отклоняться в ту или иную сторону.

Методика определения лимита гемолитического действия стафилотоксина

Разведения токсина готовят, исходя из величины Lh, указанной в паспорте препарата. Осторожно, не касаясь стенок, в 7 пробирок вносят испытуемый токсин: в среднюю – в объеме, равном величине Lh по паспорту, в остальные – в соответствующих объемах с интервалом в 0,01 мл в стороны убывания и возрастания от средней пробирки. Затем в каждую пробирку добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида до объема 1,0 мл.

СО антиальфастафилолизина разводят до содержания 1 МЕ антиальфастафилолизина в 1,0 мл и добавляют по 1,0 мл приготовленных разведений токсина в каждую пробирку с СО. В контрольную пробирку (контроль отсутствия спонтанного лизиса эритроцитов кролика) вносят 2,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Пробирки со смесью антигена (стафилотоксина) с антителом (СО антиальфастафилолизина) осторожно встряхивают и инкубируют при температуре от 18 до 22 °С в течение 15 мин. Затем в каждую пробирку ряда (опытные и контрольную) добавляют по 0,1 мл свежеприготовленной 15 % взвеси эритроцитов с установленной величиной оптической плотности. Пробирки снова осторожно встряхивают и инкубируют в термостате при температуре (37,0 ± 0,5) °С в течение 1 ч.

Результаты учитывают визуально по степени гемолиза:

(++++) – полный гемолиз эритроцитов;

(+++) – почти полный гемолиз эритроцитов;

(++) – частичный гемолиз (50 % гемолиз эритроцитов);

(+) – следы гемолиза эритроцитов;

( — ) – отсутствие гемолиза эритроцитов.

В контрольной пробирке гемолиз эритроцитов должен отсутствовать.

Количество токсина, содержащееся в первой пробирке, в которой произошел почти полный гемолиз (+++) эритроцитов, принимается за лимит его гемолитического действия в условиях опыта.

Методика определения содержания антиальфастафилолизина в испытуемых образцах в концентрации 0,2 МЕ/мл и выше

Стафилококковый токсин с установленной величиной Lh непосредственно перед проведением анализа разводят 0,9 % раствором натрия хлорида до содержания Lh/5 в 1,0 мл (рабочий раствор токсина). Количество исходного токсина и объем рабочего раствора стафилококкового токсина, необходимый для проведения анализа, рассчитывают, исходя из установленной величины Lh токсина и количества пробирок, необходимых для проведения анализа.

Для определения концентрации антиальфастафилолизина в 1 мл испытуемого сывороточного препарата готовят его разведения с учетом предполагаемого содержания антиальфастафилолизина (в МЕ/мл) по схеме (табл. 1).

Таблица 1 — Схема разведения исследуемых препаратов

№ пробирки Предполагаемое содержание антиальфастафилолизина, (МЕ/мл) Разведение препарата Количество вносимого в пробирку
исследуемого препарата, мл 0,9% раствора натрия хлорида, мл
1 0,2 0,5
2 0,5 1:2,5 1,0 1,5
3 1 1:5 1,0 4,0
4 2 1:10 1,0 9,0
5 3 1:15 0,5 (из пробирки № 3) 1,0
6 4 1:20 0,5 (из пробирки № 3) 1,5
7 5 1:25 0,5 (из пробирки № 3) 2,0
8 6 1:30 0,5 (из пробирки № 3) 2,5
9 7 1:35 0,5 (из пробирки № 3) 3,0
10 8 1:40 0,5 (из пробирки № 3) 3,5
11 9 1:45 0,5 (из пробирки № 3) 4,0
12 10 1:50 0,5 (из пробирки № 3) 4,5
13 14 1:70 0,5 (из пробирки № 4) 3,0
14 16 1:80 0,5 (из пробирки № 4) 3,5
15 18 1:90 0,5 (из пробирки № 4) 4,0
16 20 1:100 0,5 (из пробирки № 4) 4,5
17 22 1:110 0,5 (из пробирки № 4) 5,0
18 24 1:120 0,5 (из пробирки № 4) 5,5
19 26 1:130 0,5 (из пробирки № 4) 6,0
20 28 1:140 0,5 (из пробирки № 4) 6,5 и т.д

Каждый опыт сопровождается контролем, необходимым для подтверждения соблюдения условий проведения испытания. Контроль предусматривает оценку точности взятой в опыт дозы стафилококкового токсина и, при необходимости, коррекцию результатов опыта с помощью СО антиальфастафилолизина.

СО антиальфастафилолизина разводят 0,9 % раствором натрия хлорида до содержания 1 МЕ антиальфастафилолизина в 1 мл. Далее из этого разведения, содержащего 1 МЕ/мл, готовят следующие разведения по схеме (табл.2).

Таблица 2 – Схема разведения СО антиальфастафилолизина

№ пробирки Концентрация СО антиальфастафилолизина, МЕ/0,5 мл Количество вносимого в пробирку
СО антиальфа-стафилолизина в разведении 1 МЕ/мл, мл 0,9% раствора натрия хлорида, мл
1 0,12 1,0 3,17
2 0,11 1,0 3,55
3 0,10 1,0 4,00
4 0,09 1,0 4,56
5 0,08 1,0 5,25

В чистые пробирки вносят по 0,5 мл необходимых для анализа разведений испытуемого препарата (опытный ряд) и по 0,5 мл приготовленных разведений СО антиальфастафилолизина (контрольный ряд), затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл приготовленного разведения стафилококкового токсина (рабочего раствора токсина). Пробирки осторожно встряхивают круговыми движениями и инкубируют при температуре от 18 до 22 0 С в течение 15 мин.

Затем в каждую пробирку опытного и контрольного рядов добавляют по 0,05 мл свежеприготовленной 15% взвеси эритроцитов кролика с установленной величиной оптической плотности. Пробирки вновь осторожно встряхивают круговыми движениями и инкубируют при температуре (37,0±0,5) °С в течение 1 ч.

После инкубации проводят учет результатов реакции по степени выраженности гемолиза.

Учет результатов начинают с визуальной оценки степени гемолиза. Для этого в контрольном и опытном рядах отбирают последнюю пробирку, в которой отмечается начало гемолиза (+), все пробирки с 50 % (частичным) гемолизом (++) и первую пробирку с почти полным гемолизом (+++). Для остановки гемолиза отобранные пробирки помещают в холодильник на 10 минут при температуре 2 — 8 0 С. После охлаждения пробирки центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость из каждой пробирки быстро и осторожно отбирают в чистые сухие пробирки и определяют оптическую плотность при длине волны 400 нм, используя кюветы с толщиной слоя 1 мм. Раствором сравнения служит 0,9 % раствор натрия хлорида. Оптическая плотность, соответствующая 50 % гемолизу эритроцитов, должна быть равна 0,35 ± 0,05.

Аналогичным образом определяют оптическую плотность надосадочной жидкости в пробирках контрольного ряда, содержащих разведения СО антиальфастафилолизина. При оптимальных условиях опыта 50 % гемолиз эритроцитов и величина оптической плотности, равная 0,35 ± 0,05, регистрируются в пробирке, содержащей 0,1 МЕ СО антиальфастафилолизина, т.е. расчетная доза Lh/10 точно соответствует её истинному значению. В этом случае пробирка опытного ряда, в которой зарегистрирован гемолиз 50 % эритроцитов, содержит 0,1 МЕ антиальфастафилолизина в объеме 0,5 мл, что соответствует содержанию 0,2 МЕ в мл. Для расчета содержания антиальфастафилолизина в 1,0 мл неразведенного исследуемого образца, необходимо 0,2 МЕ умножить на величину разведения в данной пробирке. Например, первая пробирка, в которой надосадочная жидкость имеет величину оптической плотности 0,35±0,05, содержит препарат в разведении 1:100; следовательно, 1 мл неразведенного препарата содержит 0,2 МЕ•100=20 МЕ.

В результате влияния различных факторов возможно несоответствие дозы токсина, используемой в опыте, получаемому расчетному значению. В таких случаях при расчете специфической активности испытуемых препаратов применяется коэффициент пересчета (К), определяемый для каждого конкретного анализа по формуле:

где: а – концентрация (количество МЕ) СО антиальфастафилолизина в первой пробирке контрольного ряда, в которой зарегистрирован гемолиз 50 % эритроцитов, дающий оптическую плотность надосадочной жидкости 0,35 ± 0,05.

Методика определения содержания антиальфастафилолизина в испытуемых сывороточных образцах в концентрации не более 0,125 МЕ/мл

Для исключения искажения результатов при определении специфической активности иммуноглобулинов и препаратов крови, необходимо определять содержание антиальфастафилолизина в сыворотке крови кроликов, используемых в качестве доноров для получения эритроцитов, а также при подборе кроликов для проведения испытания иммуногенности (специфической активности), специфической безвредности и антигенной активности стафилококковых анатоксинов. Для таких целей пригодны кролики, в сыворотке крови которых антиальфастафилолизин отсутствует или содержится в количестве не более 0,125 МЕ/мл.

Для определения малых концентраций антиальфастафилолизина можно использовать метод титрования препарата с использованием более высоких разведений токсина (Lh/20, Lh/40, Lh/80, и т.д.).

Определение содержания антиальфастафилолизина в сыворотках крови кроликов проводят следующим образом: испытуемые сыворотки разводят в 5 раз 0,9% раствором натрия хлорида. Для этого в пробирку с 4,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавляют 1,0 мл сыворотки. Затем в необходимых количествах готовят разведения стафилококкового токсина с содержанием в 0,5 мл Lh/40 и Lh/80. Для приготовления разведений токсина используют токсин с точно установленной в день испытания величиной Lh.

Разведенную в 5 раз сыворотку разливают по 0,5 мл в 3 пробирки, затем в первую и вторую добавляют по 0,5 мл токсина в разведениях Lh/40 и Lh/80 соответственно, а в третью, являющуюся контрольной, вносят 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Для контроля наличия литического действия токсина берут еще 2 пустые пробирки и наливают в них по 0,5 мл каждого приготовленного разведения токсина и по 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Пробирки осторожно встряхивают, оставляют при температуре 18 -22 °С в течение 15 мин, а затем во все пробирки добавляют 0,05 мл свежеприготовленной в день испытания 15 % взвеси эритроцитов кролика-донора. Пробирки вновь осторожно встряхивают и инкубируют при температуре (37 ± 0,5)°C в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально по степени гемолиза эритроцитов (табл.3). В контрольной пробирке № 3 (без добавления токсина) гемолиз эритроцитов должен отсутствовать; в контрольных пробирках с соответствующими разведениями токсина должен произойти полный гемолиз эритроцитов.

Таблица 3 — Примеры оценки результатов опыта

№ кролика (сыворотки) Степень гемолиза в пробирках Оценка результатов

(количество МЕ/мл сыворотки)

Вывод

Lh/40 Lh/80 Контроль

сывороток

1 ++++ +++ ? 0,125 0,25 МЕ Не годен
Контроль

токсина

++++ ++++

Результаты следует считать относительно точными, поскольку опыт не сопровождается контролем с СО антиальфастафилолизина. Необходимость включения в опыт контрольного ряда СО в данном случае не оправдана, принимая во внимание цели испытания и концентрацию антиальфастафилолизина. При необходимости точного определения малых концентраций антиальфастафилолизина следует использовать методику, описанную выше, но использовать более высокие разведения токсина.

Сыворотка кроличья жидкая, BioWest (Франция), стерильная, ПЭТ, 500 мл

Источники сбора:
При поиске источника сбора сыворотки важным фактором является возможность проследить все этапы ее приготовления. Наша система вертикальной интеграции позволяет нам знать всю историю и этапы сбора сыворотки. Каждая изготовленная партия сыворотки строго контролируется с самого начала сбора сыворотки, во время стерилизации и производства и далее вплоть до упаковки ее на нашей базе. BioWest Кроличья Сыворотка производится из крови асептически взятой от кроликов. Сыворотка собирается, ввозится из за рубежа и стерилизуется в соответствии с нормативами ЕС.

Фильтрация :
Фильтруется трижды через фильтры с размером пор 0.2 мкм

Стерильность:
Все сыворотки тестируются на отсутствие аэробных и анаэробных бактерий, грибов, дрожжей и микоплазмы.
Тест стерильности основан на требованиях Европейской Фармакопеи (European Pharmacopoeia).
Сыворотки тестируются на отсутствие микоплазмы на культуре клеток.

Эндотоксин:
Все сыворотки тестируются для определения уровней эндотоксинов. Компания БиоВест выполняет хромокинетический количественный тест согласно методу D Европейской Фармакопеи. Эндотоксиновый реагент стандартизирован по референсному американскому образцу.

Гемоглобин:
Уровень гемоглобина измеряется спектрофотометром.

Осмоляльность:
Определяется на основании данных о температуре замерзания. Осмометр калиброван под стандартные растворы.

Общий белок:
Определяется методом биуретовой колориметрией.

Страна происхождения:
Страна, в которой сыворотка была взята от животного-донора.
Происхождение сыворотки BioWest из Франции.

Читайте так же:  Если кролики друг друга кусают